亲和层析标签蛋白纯化填料

His 标签蛋白纯化填料

由于组氨酸标签很小并几乎不会干扰目的蛋白的功能、活性或结构,因此被广泛使用。固定化金属离子亲合层析(IMAC)是纯化组氨酸标签蛋白最常用的方法。选择性地负载共价金属离子(比如镍或钴)的IMAC层析介质能够截留组氨酸标签蛋白,并在变性条件下,能从包涵体中纯化出不溶性的组氨酸标签蛋白。成功的IMAC纯化能得到高纯度、高产率、高活性的目的蛋白。

因为很多蛋白质有内在的组氨酸和/或半胱氨酸氨基酸残基,其他非特异的蛋白能够与目的蛋白一起结合到IMAC填充介质上。这种情况下,需要经常通过改变溶液中咪唑的浓度来优化结合、洗涤和洗脱的条件。增加结合和洗涤缓冲液中咪唑的浓度通常会降低非特异性结合,而更低的浓度则导致更强的亲和相互作用。找到合适的平衡非常关键。

MBP-标签蛋白纯化填料

麦芽糖结合蛋白(MBP)是一种有用的亲和标签,它们能增加生成目的蛋白的表达水平和溶解性。MBP标签也促进依附蛋白合适的折叠。因为MBP能增加溶解性,这个标签对以不溶形式(包涵体)聚集的重组蛋白特别有用。

亲和纯化在生理条件下发生,并且使用麦芽糖进行温和地洗脱。温和的洗脱能保留住MBP标签蛋白的活性。

Strep-tag™ II标签蛋白纯化填料

Strep-tag™II是一个只有8个氨基酸的小标签,它的相对分子量只有1000。它的小尺寸非常有好处,因为在绝大多数情况下它不会干扰结构和功能研究,因此无需去除。

Strep-tag™ II特异性地结合拥有固定在琼脂糖基底基质的StrepTactin™配体的StrepTactin™ Sepharose High Performance以获得到高纯度的目的蛋白。Strep-tag™ II与该配体的结合亲和力是链霉亲和素的近100倍,使其适合于纯化Strep-tag™II蛋白。在生理条件下进行纯化,含有脱硫生物素的温和洗脱液保留了目的蛋白的活性。

GST-标签蛋白纯化填料

谷胱甘肽s-转移酶(GST) 基因融合系统是用于从大肠杆菌中生产的GST-标签蛋白的表达、纯化和检测的通用系统。可在非常温和的条件下对GST-标签蛋白进行纯化,从而保留目的蛋白的功能和抗原性。

GST标签可能增加目的蛋白的溶解性和稳定性。GST标签很大,其相对分子量(Mr)为26000。一段特殊的切割序列允许在纯化后用不同的蛋白酶简单地去除GST标签。

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