NI SEPHAROSE 6FF, 25 ML

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17531801
描述:
Ni SEPHAROSE 6 Fast Flow, 25 mL
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Ni Sepharose 6 Fast Flow是一种高结合量的IMAC层析填料,用于纯化组氨酸标签的蛋白质。在各种规模中用于纯化的良好选择。


产品特点


这是一款最常规的填料,有着高载量,良好的兼容性、流速快、易放大等特点,是组氨酸标签手动纯化的常规选择,是一款经济实惠的入门基本款



常见问题


纯化所得组分中为何没有重组的His标签蛋白?


一方面  若His标签蛋白没有结合到填料上就流穿了


原因1 超声的功率不对

超声功率过高,容易导致蛋白炭化;功率过低,蛋白释放不出来。

建议:改变超声功率,同时可以在超声前加入溶菌酶。


原因2 结合缓冲液条件不合适

建议:检查结合缓冲液中是否有影响结合的因素,如:金属离子螯合剂、强还原剂、过高的咪唑浓度。pH的改变也会对结合效果有影响,可以摸索不同的pH条件,可能会收到意想不到的效果。


原因3 His标签没有表达或丢失或暴露不充分

建议1:用anti-His的抗体进行WB,检测His标签是否存在。

建议2:将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后,让His标签充分暴露出来,看是否能与填料结合。

建议3:改变His标签的位置或者增加其数目(常用6-10个His),增加暴露和结合机会。

建议4:改变金属结合离子,除了Ni2+,Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。



另一方面  若His标签蛋白结合了,但是洗脱不充分


原因1 洗脱条件太温和

建议:增加咪唑的浓度或选择咪唑线性梯度洗脱,或者通过降低pH寻找最佳洗脱条件。需要注意的是,pH低于3.5容易导致镍离子脱落。


原因2 蛋白柱上沉淀

建议1:降低蛋白浓度。可以减少上样量,或者采用咪唑线性而非步级梯度洗脱,增加蛋白稀释度。

建议2:使用去污剂或者改变NaCl的浓度,或者使用变性剂(4-6M盐酸胍或4-8M尿素)在变性条件下洗脱。


原因3 非特异性的疏水或者其他相互作用

建议:加入非离子型去污剂到洗脱缓冲液(如:2% Triton X-100)或增加NaCl的浓度洗脱。